澳洲胎牛血清是一種性狀、外觀(guān)淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分少。
澳洲胎牛血清主要用途:
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
具體澳洲胎牛血清制備操作方法如下:
首先、血液采集
1、挑選出大約8月齡以上的健康妊娠母牛,經(jīng)剖腹獲取小牛。
2、將小牛清洗干凈后,側(cè)放在萬(wàn)級(jí)潔凈房間內(nèi)的采血臺(tái)上,固定四肢及頭部。
3、用來(lái)蘇水清洗心臟外部,刮去心臟外部牛毛,露出心臟外部一側(cè)皮膚,用2%碘酒擦拭消毒。
4、在心臟部位切開(kāi)一道10厘米左右的切口,取出近心血管,先用2%碘酒消毒,再用75%的酒精消毒,用止血鉗夾住血管,切開(kāi)1厘米左右的切口進(jìn)行插管,插好管后打開(kāi)血管的止血鉗,讓牛血順采血管流入另一個(gè)潔凈房間內(nèi)的采血瓶中。
5、采血瓶采血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時(shí))后,按無(wú)菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采血前半小時(shí)放入37℃恒溫箱備用。采血前先晃動(dòng)瓶?jī)?nèi)生理鹽水,使其充分濕潤(rùn)瓶壁后倒出,再進(jìn)行采血并加塞封口。將采血后的采血瓶放37℃恒溫室2小時(shí),再放入4℃冷庫(kù)4小時(shí)以備離心。
第二步、離心
將準(zhǔn)備好的采血瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對(duì)稱(chēng)放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫(kù)備用。
第三步、抽血清
取出4℃冷庫(kù)離心好的采血瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過(guò)高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開(kāi)壓縮機(jī),用抽血清孔的管子輕輕抽取采血瓶?jī)?nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫(kù)冷藏備用。
第四步、澳洲胎牛血清過(guò)濾
1、將-20℃冷庫(kù)內(nèi)的粗制血清取出化凍。
2、將化凍后的粗制血清用經(jīng)過(guò)高壓滅菌的12層醫(yī)用脫脂棉紗布進(jìn)行初濾。
3、把初濾后的血清倒入大罐進(jìn)行混合。
4、將裝好濾芯的濾器做密封性試驗(yàn)和發(fā)泡試驗(yàn)合格后,經(jīng)過(guò)高壓滅菌,在潔凈室內(nèi)用無(wú)菌操作法將濾器按濾柱孔徑由大到小的順序進(jìn)行組裝,并裝上壓力表。把濾器大孔徑一端和蠕動(dòng)泵出口進(jìn)行連接。
5、用蠕動(dòng)泵將大罐內(nèi)的血清送入濾器進(jìn)行過(guò)濾。
6、將濾出的血清在百級(jí)凈化操作臺(tái)上進(jìn)行分裝后,即為精制胎牛血清,送-20℃冷庫(kù)儲(chǔ)存。